مواد
- مراحل
- طریقہ 1 گرام داغ کے ذریعہ ایک جراثیم کی شناخت کریں
- طریقہ 2 زیہل نیلسن داغدار ٹیسٹ کروائیں
- طریقہ 3 بیکٹیریا کے طرز عمل اور ظہور کا مطالعہ کریں
- طریقہ 4 تمام نتائج کی ترجمانی کریں
بیکٹیریا کی شناخت ایک پیچیدہ کام ہے۔ اس کی ایک وجہ یہ ہے کہ تخمینوں کے مطابق ، دنیا میں 10 000 اور 1 بلین بیکٹیریل نوع موجود ہیں! بیکٹیریا کی مناسب طریقے سے نشاندہی کرنا بہت ضروری ہے ، خاص طور پر طبی میدان میں ، جہاں کسی بیماری کا مناسب علاج بڑی حد تک انحصار کرتا ہے جس میں مائکروب کی قسم ہے جو پریشانی کا باعث ہے۔ زیادہ تر معاملات میں ، شناخت خاتمے کی بنیاد پر کی جاتی ہے۔ ایک جراثیم کی نشاندہی کرنے کے ل you ، آپ کو داغدار ٹیسٹ کروانے چاہئیں ، اس کی ظاہری شکل کا تجزیہ کریں اور مشاہدہ کریں کہ یہ مختلف حالتوں میں کس طرح اچھا ردعمل دیتا ہے۔ اگر آپ کو فوری نتائج کی ضرورت ہو تو ، لیب میں بھیجنے کے لئے ڈی این اے نمونہ لیں۔
مراحل
طریقہ 1 گرام داغ کے ذریعہ ایک جراثیم کی شناخت کریں
- کا تعین اگر بیکٹیریا گرام مثبت یا منفی ہیں۔ گرام داغدار دو عام اقسام کے درمیان بیکٹیریا تقسیم کرنے کا ایک طریقہ ہے: گرام مثبت اور گرام منفی۔ سابقہ میں ایک موٹی سیل دیوار ہوتی ہے جس پر مشتمل ایک پالیمر ہوتا ہے جسے پیپٹائڈوگلیان کہتے ہیں ، جس میں گرام منفی بیکٹیریا کی پتلی دیواروں کی طرح بہترین داغ پڑتا ہے۔
- گرام مثبت بیکٹیریا کی کچھ عام اقسام اسٹریپٹوکوکی ، اسٹیفیلوکوسی ، مائکروکوسی (یا مائکروکوسی) اور لیسٹریا ہیں۔
- یہاں گرام منفی بیکٹیریا کی کچھ عام مثالیں ہیں: نیزیریا ، ایکینیٹوبایکٹر ، موراکسیلا ، انٹروبیکٹیریا ، وبریو ، ہیمو فیلس ، فوسوبیکٹیریم اور کیمپلو بیکٹر۔
- مناسب حفاظتی اقدامات کریں۔ آپ جو ٹیسٹ کے دوران بیکٹیریا اور کیمیائی عناصر استعمال کریں گے وہ آپ کی صحت کے لئے خطرہ ہیں۔ سٹیننگ ٹیسٹ کرتے وقت حفاظتی چشمیں ، ڈسپوز ایبل نائٹریل دستانے اور لیب کوٹ پہنیں۔ کام ختم ہوجانے کے بعد ، دستانے اور دیگر تمام آلودہ اشیاء کو ایک خاص بیگ میں رکھیں۔ آلودہ مصنوعات کے لئے بیگ سے چھٹکارا پانے کیلئے اپنے لیبارٹری کے طریقہ کار پر عمل کرنا یاد رکھیں۔
- نمونے کو شیشے کی سلائیڈ پر مشاہدہ کریں۔ ٹیسٹ شروع کرنے کے لئے ، جراثیم سے پاک سلائیڈ پر ڈراپ یا بیکٹیریل نمونہ رکھیں۔ اس کے بعد ، نمونے کو ٹھیک کرنے کے لئے بونسن برنر لائٹ کے اوپر بلیڈ کو تین بار سلائیڈ کریں اور پلیٹن سے باہر آنے سے روکیں جب آپ کللا کرتے ہیں یا ری ایجنٹس شامل کرتے ہیں۔
- بلیڈ میں جامنی رنگ کے کرسٹل کے 5 قطرے شامل کریں۔ کرسٹل وایلیٹ حل کے پانچ قطرے نمونے پر ڈالیں۔ نمونے کے لئے کرسٹل وایلیٹ جذب کرنے کے لئے ایک منٹ انتظار کریں۔
- کپڑے کے پنوں کے ساتھ بلیڈ کو جگہ پر رکھیں تاکہ آپ اپنے ہاتھوں پر داغ نہ لگائیں۔
- داغ دور کرنے کے لئے بلیڈ کو اچھی طرح دھوئے۔ ایک نل یا نچوڑ کی بوتل کا استعمال کریں اور سیاہی کی باقیات کو دور کرنے کے لئے پانی کو پانچ سیکنڈ تک بہت آہستہ آہستہ چلنے دیں جو نمونے کی پاسداری نہیں کرتے ہیں۔
- گرام ڈایڈڈ داغ کے پانچ قطرے سلائیڈ پر ڈالیں۔ یہ ایک حل ہے جو ڈایڈڈ ، سوڈیم بکاربونٹیٹ اور پوٹاشیم ڈائیڈائڈ پر مشتمل ہوتا ہے جس کی وجہ سے بیکٹیریا کے خلیوں کی دیواروں کے ساتھ کرسٹل وایلیٹ پگھل جاتا ہے۔ نمونے پر حل کے پانچ قطرے ڈالیں اور ایک منٹ کے لئے چھوڑ دیں۔
- نمونے کو الکحل یا لیکٹک ایسڈ سے دھوئے۔ الکحل اور لیسیٹون بلیچنگ ایجنٹ ہیں اور اگر وہ گرام منفی ہوں تو بیکٹیریل سیل دیواروں کا داغ ختم کردیں گے۔ نمونے پر بلیچ کے کچھ قطرے ڈالیں اور اسے تین سیکنڈ سے زیادہ کام کرنے کی اجازت نہیں دیں۔ اس کے بعد ، ان بلیچنگ ایجنٹوں کو دور کرنے کے لئے پانچ سیکنڈ کے لئے پانی سے آہستہ سے کللا کرنے کی کوشش کریں۔
- اگر آپ بلیچ کو طویل عرصے تک کام کرنے دیتے ہیں تو ، اس کا نتیجہ گرام مثبت بیکٹیریا سے داغ غائب ہوجاتا ہے ، جس کا نتیجہ غلط منفی ہوتا ہے۔
- سفرینن کے ساتھ برعکس ٹیسٹ کروائیں۔ سفرینن ایک سرخ رنگ ہے جو کرسٹل وایلیٹ سے متضاد ہے ، اس طرح جامنی رنگ کے داغ سے متاثر ہونے والے بیکٹیریا کو رنگ دیتا ہے۔ نمونے پر سفینن کے تقریبا پانچ قطرے ڈالیں اور ایک منٹ کے لئے چھوڑ دیں۔ اس کے بعد ، پانچ سیکنڈ کے لئے پانی سے آہستہ سے کللا کرنے کی کوشش کریں۔
- اپنے نمونے کو 1000 X اضافہ پر دیکھیں۔ بیکٹیریا جامنی یا ارغوانی ہوجائے گا اگر یہ گرام مثبت ہے ، یا گلابی ہے اگر یہ سفینن کی وجہ سے گرام منفی ہے۔
طریقہ 2 زیہل نیلسن داغدار ٹیسٹ کروائیں
- تیزاب بیکٹیریا کا پتہ لگانے کے لئے اس تکنیک کا استعمال کریں۔ ان پرجاتیوں میں لپڈ کی زیادہ مقدار ہوتی ہے جس کی وجہ سے وہ گرام داغوں میں استعمال ہونے والے رنگوں کے خلاف زیادہ مزاحم بنتا ہے۔ تیزاب سے مزاحم بیکٹیریا کا تعلق مائکوبیکٹیریم جینس سے ہے ، جس میں تپ دق (ایم تپ دق) کے لئے ذمہ دار بیکٹیریم بھی شامل ہے۔ تیزاب سے بچنے والے جراثیم کو رنگنے کے ل you ، آپ کو ایک سرخ رنگ کا استعمال کرنا چاہئے جو کاربولک فوسن کہتے ہیں ، جو تیزابیت یا سلفورک ایسڈ کے حل سے دھلائی کے خلاف مزاحم ہے۔
- مناسب حفاظتی اقدامات کریں۔ زیہل نیلسن داغ داغ کے دوران استعمال ہونے والے کیمیائی اور حیاتیاتی مواد خطرناک ہوسکتے ہیں۔ اس کے علاوہ ، آپ کو گرمی کے ذرائع بھی استعمال کرنے کی ضرورت ہوگی ، جیسے بونسن نوزل ، بجلی کا ہیٹر یا الکحل لیمپ۔ ٹیسٹ کرنے کے لئے نیچے دی گئی ہدایات پر عمل کریں۔
- چشمیں ، نائٹریل دستانے اور لیب کوٹ ڈالیں۔
- ہوشیار رہیں کہ رنگوں اور بلیچوں سے بخارات سانس نہ لیں اور قطرہ قطرہ آپ کی آنکھوں یا جلد کو چھڑکنے نہ دیں۔ کنٹینر کو ہڈ کے نیچے کھلا رکھیں۔
- بلیڈ کو گرم کرتے وقت بہت محتاط رہیں۔ استعمال ہونے والے بیشتر کیمیکل آتش گیر ہیں۔ سلائیڈوں یا دیگر سامانوں پر آتش گیر مادے کے آثار بھی ہوسکتے ہیں۔
- بلیڈ تیار کریں۔ سرکلر حرکات کے ساتھ ، جراثیم سے بھرے ہوئے سلائڈ کے بیچ میں بیکٹیریل نمونے کی تھوڑی سی مقدار یکساں طور پر پھیلائیں۔ آپ کے نمونے میں تقریبا 10 ملی میٹر 20 ملی میٹر تک قبضہ کرنا چاہئے۔
- خشک بلیڈ خشک کرنے والی ساخت پر بلیڈ کو نمونے کے ساتھ اوپر کی طرف رکھیں۔ اسے 30 سیکنڈ تک قدرتی طور پر خشک ہونے دیں۔ کسی کپڑے سے بلیڈ کو خشک کرنے کی کوشش نہ کریں۔
- نمونے کو گرمی سے محفوظ رکھیں۔ نمونہ اوپر کرنے کے ساتھ ، بلیڈ بسن برنر کے اوپر بلیڈ کو دو یا تین بار سلائیڈ کریں۔ آپ کم از کم دو گھنٹوں کے لئے 65 ° C اور 75 ° C کے درمیان درجہ حرارت طے کرکے بلیڈ کو الیکٹرک ہیٹر پر بھی رکھ سکتے ہیں۔ ہوشیار رہیں کہ نمونے کو ابل نہ دیں یا جلائیں۔
- بلیڈ میں کاربولک فوچین شامل کریں۔ اس حل کے کئی قطرے سلائیڈ پر ڈالیں۔ نمونے کو مکمل طور پر ڈھانپنے کے لئے کافی ڈالو۔
- رنگنے کو ٹھیک کرنے کے لئے بلیڈ کو گرم کریں۔ بونسن برنر یا الکحل لیمپ کے اوپر سلائیڈ کو احتیاط سے گرم کریں ، نمونے کے ساتھ اوپر کی سمت رکھیں ، یا اسے الیکٹرک ہیٹر پر رکھیں۔ 60 ° C تک بلیڈ کو گرم کریں یا جب تک یہ بھاپ کو چھوڑنا شروع نہ کردے۔ ڈائی پانچ منٹ تک کام کرنے دیں۔
- اگر آپ بجلی کا ہیٹر استعمال کررہے ہیں تو اسے 60 ° C پر چالو کریں۔ اگر آپ الکحل لیمپ یا بونسن برنر کا انتخاب کرتے ہیں تو ، آپ کو دھوئیں دیکھنے کی توقع کرنی چاہئے۔
- پانچ منٹ تک مطلوبہ درجہ حرارت پر بلیڈ رکھنے کے ل keep ، اسے وقفے وقفے سے گرم کریں۔
- ہوشیار رہیں کہ نمونے کو ابلنے ، جلانے یا خشک نہ کریں۔
- ٹھنڈے پانی سے بلیڈ کللا کریں۔ اسے پانچ منٹ کے لئے ٹھنڈا ہونے دیں اور کچھ سیکنڈ کے لئے صاف پانی سے آہستہ سے کللا کریں۔ رنگنے والے داغوں کو دور کرنے کے لئے نل کے پانی یا نچوڑ کی بوتل کا استعمال کریں جو نمونے پر قائم نہیں ہیں۔
- نمونہ ایسڈک الکحل یا سلفورک ایسڈ پر ڈالو۔ نمونہ کو مکمل طور پر ڈھانپنے کے ل 3 3 فیصد حجم (v / v) شراب یا 20٪ سلفورک ایسڈ کے ذریعہ استعمال کریں۔ تیزاب کو اس وقت تک کام کرنے کی اجازت دیں جب تک کہ رنگ مٹ جاتا ہے اور گلابی رنگ کی روشنی بہت ہی روشن ہوجاتی ہے۔ اس عمل میں عام طور پر دس منٹ لگتے ہیں۔
- بلیڈ کو کللا کرنے کے لئے صاف پانی کا استعمال کریں۔ آہستہ سے کسی نل کے نیچے یا نچوڑ کی بوتل کا استعمال کرتے ہوئے بلیڈ کو دھویں۔ تمام تیزاب اور رنگنے والے اوشیشوں کو اچھی طرح سے ہٹا دیں۔
- اس کے برعکس ایجنٹ شامل کریں۔ ایک بار جب آپ سلائیڈ کو کللا کر لیتے ہیں تو ، میلائچائٹ گرین یا میتھیلین بلیو کے رنگ پر ڈالیں۔ یہ دونوں حل ایک نیلے یا سبز رنگ کے پس منظر کی تخلیق کرتے ہیں جس پر سرخ رنگت ابھرے گی ، اسی طرح دیگر حیاتیاتی مواد ، جیسے انسانی خلیات اور نان ایسڈ مزاحم جراثیم۔ مادہ کو ایک سے دو منٹ تک کام کرنے دیں۔
- بلیڈ کو کللا اور خشک کریں۔ ضرورت سے زیادہ تضاد کو دور کرنے کے لئے پانی سے اچھی طرح کللا کریں۔ ایک بار جب آپ کام کر لیں ، تو بلیڈ کے پیچھے خشک کپڑے سے سوکھیں اور اسے اسٹینڈ پر قدرتی طور پر خشک ہونے دیں۔
- اپنے نمونے کو 1000 X اضافہ پر دیکھیں۔ تیزاب سے بچنے والے بیکٹیریا سرخ یا گہرے گلابی ہوجائیں گے۔ دوسرے بیکٹیریا ، غیر بیکٹیریل خلیات اور بلیڈ کی بنیاد سبز یا نیلے ہوجائے گی۔
طریقہ 3 بیکٹیریا کے طرز عمل اور ظہور کا مطالعہ کریں
- بیکٹیریا کی شکل کا تجزیہ کریں۔ داغدار ٹیسٹ کرنے کے بعد کہ یہ معلوم کرنے کے لئے کہ آیا بیکٹیریا گرام پازیٹیو ، گرام منفی یا تیزابیت سے بچنے والے ہیں ، اب یہ وقت آگیا ہے کہ نوع کی زیادہ واضح طور پر شناخت کی جائے۔ پہلے سلائڈ پر بیکٹیریا کی شکل کا تجزیہ کریں۔ تین سب سے زیادہ عام شکلیں ہیں کوکی (کروی)، سرپل اور بیسیلی (چھڑی کی شکل)۔
- ان فارم کی متعدد قسمیں ہیں۔ گول کے سائز والے بیکٹیریا (کوککس) ، مثال کے طور پر ، جوڑے (ڈپلوکوسی) میں ، زنجیروں میں ، ڈھیروں میں یا چار (ٹیٹراڈس) کے گروہوں میں ظاہر ہو سکتے ہیں۔
- معلوم کریں کہ آیا یہ بیکٹیریا ایروبک ہے یا غیر انوبک ہے۔ بیکٹیریا کے دو نمونے لیں اور دو الگ الگ کلچر تشکیل دیں۔ چاند لازمی ہونا چاہئے (آکسیجن کے بغیر اگا ہوا) ، جبکہ دوسرا ایروبک ہونا چاہئے (آکسیجن کے ساتھ اگا ہوا)۔ نشوونما سے متعلق ثقافت کو 35 for C پر آکسیجن سے پاک جگہ پر کم سے کم 48 گھنٹوں کے لئے نشوونما سے پہلے نمو کریں۔
- اگر بیکٹیریا آکسیجن کے بغیر ماحول میں بڑھتے ہیں ، لیکن جب آکسیجن کے سامنے نہیں آتے ہیں تو ، اس کا مطلب یہ ہے کہ وہ anaerobic ہیں۔
- اگرچہ وہ آکسیجن ماحول میں ترقی کرتے ہیں ، لیکن آکسیجن کی عدم موجودگی میں ، وہ ایروبک ہیں۔
- جب وہ دونوں ماحول میں ترقی کرتے ہیں تو ، ہم انجیلی بیکٹیریا کے بارے میں بات کرتے ہیں۔
- ایک گتشیلتا ٹیسٹ کروائیں۔ بیکٹیریم موبائل ہے اگر وہ ایک یا زیادہ فلاجیلا کے ساتھ تنہا منتقل ہوسکتا ہے۔ کچھ بیکٹیریل پرجاتیوں کی شناخت میں تحریک کی ڈگری بہت ضروری ہے۔ اس میں کئی طرح کی حرکتی ہیں ، لیکن سب سے محفوظ اور سب سے محفوظ طریقہ نیم ٹھوس میڈیم ہے۔
- حرکتی جانچ کے ل a ایک ثقافت تشکیل دیں۔ ثقافت والے شوربے میں بیکٹیریا کی ثقافت تیار کریں۔ اپنی پسند کا شوربہ تیار کرنے کے لئے نیچے دی گئی ہدایات پر عمل کریں۔
- نقل و حرکت کے ٹیسٹ کے ل the ثقافت کو نیم ٹھوس ایگر میں لگائیں۔ جراثیم کُش انجکشن کے ساتھ شوربے کے کلچر کا ایک حصہ کوٹ کریں۔ نیم ٹھوس ڈگر ٹیوب ، جیسے ٹی ٹی سی لیگر میں انجکشن لگائیں ، جسے آپ نے ٹیسٹ کے لئے تیار کیا ہے۔ سواری ایگر میں 2/3 داخل کرنا چاہئے۔
- جب آپ کام کرلیں تو ، انجکشن کو احتیاط سے ہٹا دیں ، اس بات کا خیال رکھیں کہ ٹیکہ لگانے کے زون کی حد سے تجاوز نہ کریں۔
- ٹیوب کو 30 ڈگری سینٹی گریڈ پر 48 گھنٹوں تک رکھیں۔
- امتحان کا نتیجہ پڑھیں۔ حرکت پذیری کی جانچ کے ل ag اگرگر بیکٹیریا کے ساتھ رابطے میں سرخ ہوجائے گا۔ اگر وہ موبائل ہیں تو ، یہ سرخ یا گلابی رنگت مادہ میں پھیل جائے گی۔ بصورت دیگر ، داغ صرف انجیکشن سائٹ تک ہی محدود ہوگا۔
طریقہ 4 تمام نتائج کی ترجمانی کریں
- اپنے تاثرات جمع کریں۔ بیکٹیریا کی قسم جاننے کے ل you ، آپ کو ثقافتوں ، رنگین ٹیسٹ اور فارموں کے مشاہدے سے حاصل کردہ معلومات کو جمع کرنے کی ضرورت ہوگی۔ اگر آپ مریض کے نمونوں کی جانچ کر رہے ہیں تو ، ان کی علامتوں سے یہ معلوم ہوتا ہے کہ وہ مناسب قسم کے بیکٹیریا کا تعین کرنے میں بھی مدد کرسکتے ہیں۔
- مثال کے طور پر ، اگر جانچ پڑتال سے پتہ چلتا ہے کہ بیکٹیریا گرام منفی ، اینیروبک ، غیر تحرک ہیں اور آپ کو مریض میں پیٹ میں درد ، متلی اور الٹی کی علامات نظر آتی ہیں تو ، امکان ہے کہ مریض بیکٹیرایڈز انفیکشن کا شکار ہو۔ fragilis سے.
- ڈیٹا بیس سے مشورہ کریں۔ دنیا میں بیکٹیریا کی ہزاروں اقسام ہیں۔ دل سے سب کچھ جاننا ناممکن ہے۔ بیکٹیریل پرجاتیوں سے متعلق معلومات کے ساتھ جانچ کے نتائج کا موازنہ کرنے کے ل You آپ کو کلینیکل مائکرو بایولوجی کتاب یا آن لائن ڈیٹا بیس سے مشورہ کرنے کی ضرورت ہوگی۔
- بیکٹیریا کی شناخت کے ل for بہترین آن لائن وسائل موجود ہیں ، لیکن ان میں سے بیشتر ڈیٹا بیس انگریزی میں دستیاب ہیں ، جن میں پیٹرک برک ڈاٹ آرگ اور گلوبل آر پی ایچ شامل ہیں۔ تاہم ، آپ ابھی بھی آئی این آر اے انٹرنیشنل مائکروبیل ریسورس سینٹر ویب سائٹ پر مفید معلومات حاصل کرسکتے ہیں۔
- بیکٹیریا کی عین نوع کو جاننے کے لئے جینیاتی ٹیسٹ کریں۔ کچھ معاملات میں ، آپ کو بیکٹیریا کی نوع کی شناخت کرنے کی ضرورت پڑسکتی ہے۔ ڈی این اے ٹیسٹ کروانا سب سے تیز اور آسان ترین طریقہ ہے۔ ڈی این اے ٹیسٹ داغدار اور ثقافت کی روایتی شکلوں سے مزاحم بیکٹیریا کی نشاندہی کرنے کے لئے بھی کارآمد ہیں۔ آج کل ، مائکروجنزموں پر ڈی این اے ٹیسٹ بہت تیز ہیں اور وہ دو گھنٹے سے بھی کم وقت میں تیار ہوسکتے ہیں۔
- اگر آپ کو کسی ایسی لیبارٹری تک رسائی حاصل نہیں ہے جو مائکروجنزموں کی جینیاتی ترتیب کو انجام دیتا ہے تو ، ایک بیکٹیریا کا نمونہ کسی خصوصی ایجنسی کو بھیجیں۔